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聚丙烯酰胺凝胶的变性与非变性

点击次数:   更新时间:23/02/08 08:53:02     来源:www.renqiuyiyuanhg.com关闭分    享:
  聚丙烯酰胺凝胶是一种合成凝胶,由丙烯酰胺单元中的亚甲基双丙烯酰胺交联,烘干,粉碎或加工成颗粒。通过控制交联剂的量,可以制备各种类型的凝胶。交联剂越多,孔越小。聚丙烯酰胺凝胶的商业产品是Bio-Gelp,是日本tosoh的TSKGEL的pw系列,适用于蛋白质和多糖的纯化。即丙烯酰胺和少量交联剂亚甲基双丙烯酰胺在催化剂Temed和氧化剂过硫酸铵作用中聚合形成凝胶。今天我们将看看两种电泳形式的聚丙烯酰胺凝胶。
  变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)是基于寡核苷酸的大小,所以全长产物可以从不完全的短分子中分离出来。通常,在电泳过程中,每个泳道中至少加入1 mg合成寡核苷酸。电泳后,将寡核苷酸条带置于紫外灯下,从凝胶上切下正确长度的寡核苷酸。原理:蛋白或多肽与SDS结合后,经过热变性和二硫键还原,形成负电荷相对一致的未折叠衍生物,其迁移速度主要由分子量决定。
  非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)或活性电泳,用于活性蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳,不添加变性剂如SDS和乙醇,常用于酶鉴定、同工酶分析和纯化。不含SDS的天然pam凝胶电泳可以保持生物大分子在电泳过程中的天然形状和电荷。它们的分离是基于凝胶分子筛的电泳淌度和作用的不同,因此可以获得更高的分离度。尤其是电泳分离后,蛋白质、酶等生物大分子的生物活性仍能保持,这对生物大分子的鉴定具有重要意义。在这种方法中,两个相同的样品在凝胶上电泳。电泳后将凝胶切成两半,一半用于活性染色以鉴定特定的生物大分子,另一半用于染色所有样品以分析样品中各种生物大分子的种类和含量。

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